0512-63061203
腺病毒载体(Adenovirus)能够携带大片段外源DNA、感染分裂细胞和非分裂细胞、诱导体液和细胞免疫应答(这对于疫苗开发是有益的)、表现出高效率的转导和高水平的转基因表达、不整合细胞DNA(在细胞内保持dsDNA游离体)。这些特性使腺病毒作为用于基因治疗的转基因载体、疫苗载体和溶瘤病毒疗法中使用的载体。我们开发出一系列专有技术和试剂,从病毒滴度、纯度、活性以及一致性等方面显著提升了腺病毒包装工艺水平。
目录号 | 产品信息 | 规格 | 滴度 | 价格(CNY) | 生产时间 |
---|---|---|---|---|---|
H106 | 干扰腺病毒(一个干扰病毒) | 1ml | 1*1010PFU/ML | ¥4800 | 25个工作日 |
H107 | 干扰腺病毒套餐(三个干扰病毒一个阴性对照) | 4*1ml | 1*1010PFU/ML | ¥11000 | 30个工作日 |
H108 | 过表达腺病毒2000bp以下 | 1ml | 1*1010PFU/ML | 基因长度*¥1+¥6880 | 咨询 |
H109 | 过表达腺病毒4000bp以下 | 1ml | 1*1010PFU/ML | 基因长度*¥1+¥6880 | 咨询 |
H110 | 腺病毒阴性对照 | 1ml | 1*1010PFU/ML | ¥1500 | 10个工作日 |
生产规格 | 非纯化慢病毒制备服务 | 纯化慢病毒制备服务 |
---|---|---|
交付内容 |
定制病毒,按照规格交付:
|
定制病毒,按照规格交付:
|
对照病毒,按照定制病毒的规格对应赠送:
|
对照病毒,按照定制病毒的规格对应选购:
|
|
聚凝胺(Polybrene,5 mg/ml,200 ul),赠送 |
聚凝胺(Polybrene,5 mg/ml,200 ul),赠送 |
|
辅助病毒,按照定制病毒的规格对应选购:
|
辅助病毒,按照定制病毒的规格对应选购:
|
|
病毒重悬液 | 腺病毒专用储存液 | GTS缓冲液 |
运输/存储 | 干冰/-80°C,避免反复冻融 | 干冰/-80°C,避免反复冻融 |
推荐应用 | 体外培养细胞转导 | 动物体内细胞转导 |
为了更好地开展您的实验,我们按照“对照病毒与定制病毒的生物学应用相匹配”的原则给您赠送或者推荐对照病毒。例如,如果定制病毒表达一个基因,则推荐的对照病毒表达荧光蛋白EGFP。如果定制病毒表达打靶某个基因的shRNA,则对照病毒表达一个Scramble shRNA。推荐的对照病毒信息如下表所示:
对照病毒 | 对照载体名称 | 对照载体ID | 定制病毒 | |||
---|---|---|---|---|---|---|
EGFP对照腺病毒,CMV启动子 |
pAV[Exp]-CMV>EGFP |
VB010000-9299hac | 哺乳动物基因表达腺病毒(包含FLEX条件性表达)、哺乳动物腺病毒CRISPR系统、哺乳动物非编码RNA表达腺病毒 |
|||
EGFP对照腺病毒,EF1A启动子(选购) |
pAV[Exp]-EF1A>EGFP |
VB900088-2235wrm | ||||
mCherry对照腺病毒,CMV启动子(选购) |
pAV[Exp]-CMV>mCherry |
VB010000-9300kfr | ||||
mCherry对照腺病毒,EF1A启动子(选购) |
pAV[Exp]-EF1A>mCherry |
VB010000-9408agb | ||||
Scramble shRNA对照腺病毒,EGFP荧光 |
pAV[shRNA]-EGFP-U6>Scramble_shRNA |
VB010000-9300kfr | 哺乳动物shRNA干扰腺病毒 |
|||
Scramble shRNA对照腺病毒,mCherry荧光 |
pAV[shRNA]-CMV>mCherry-U6>Scramble_shRNA |
VB010000-0021kwc | ||||
Scramble miR30-shRNA对照腺病毒,EGFP荧光 |
pAV[miR30]-CMV>EGFP:Scramble_miR30-shRNA:WPRE |
VB010000-9350dnk | 哺乳动物miR30-shRNA干扰腺病毒 |
|||
FLEX-EGFP对照腺病毒(选购) |
pAV[FLEX_on]-CMV>rev(EGFP) |
VB010000-9327vmy | 哺乳动物基因FLEX条件性表达腺病毒 |
为了更好地开展您的实验,我们按照“辅助病毒与定制病毒的生物学应用相匹配”的原则给您推荐辅助病毒。例如,如果定制化的病毒是一个gRNA腺病毒(只表达gRNA),则需要一个表达Cas9的辅助病毒,才能进行CRISPR编辑实验。推荐的辅助病毒信息如下表所示:
对照病毒 | 对照载体名称 | 对照载体ID | 定制病毒 |
---|---|---|---|
Cas9 腺病毒(选购) |
pAV[Exp]-CMV>hCas9 |
VB180820-1032mbq | 哺乳动物gRNA 腺病毒(不含Cas9) |
Cre腺病毒(选购) |
pAV[Exp]-CMV>Cre |
VB180308-1398jmt | 哺乳动物基因FLEX条件性表达腺病毒 |
步骤 | 描述 | 时间 |
---|---|---|
![]() Plasmid linearization and Transfection |
我们常规使用的第一代腺病毒包装系统包括1个含有缺失了E1/E3基因的腺病毒基因组序列的转移质粒(Transfer plasmid)和1个表达E1基因的包装细胞(adenoviral E1-expressing cell line),其包装流程是通过内切酶PacI将携带目的基因(Gene of Interest,简称GOI)的转移质粒线性化。线性化的质粒DNA随后转染到包装细胞中,E1基因的表达产物激活转移质粒上的腺病毒基因的表达(E3基因的缺失不影响腺病毒的包装),产生重组腺病毒颗粒。此时生产出来的为粗制的腺病毒。 | 第1-6天 |
![]() Virus amplification |
粗制的腺病毒再次转导到在包装细胞中进行扩增。 | 第7天 |
![]() Concentration and purification |
对于非纯化的腺病毒,腺病毒可以被细胞直接分泌到培养基中,然后进行收集。对于超纯化腺病毒,则还需要进一步的氯化铯(CsCl)密度梯度离心进一步纯化和浓缩。 | 第24天 |
![]() Quality Control |
对于每一个我们生产的腺病毒,质量控制均包括基于免疫组化(IHC)的滴度测定(Titer determination)、微生物(细菌和真菌)检测(Bioburden test)和支原体检测(Mycoplasma test)。 若转移载体同时编码一个荧光蛋白,我们还会将病毒进行细胞转导以测定相应的荧光表达情况(Transduction test)。此外,对于超纯化腺病毒,我们还可以检测内毒素水平(Endotoxin test)。 | 第28天及以后 |
注意: 第三代慢病毒包装系统只能包装第三代的慢病毒转移载体。但是第二代慢病毒包装系统既能包装第二代,也能包装第三代的慢病毒转移载体。第三代慢病毒转移载体上的5’ LTR中的U3元件是被一个外源启动子替代(如CMV启动子或者RSV启动子),使其不依赖Tat蛋白进行HIV RNA基因组的转录,故第三代慢病毒包装系统的包装质粒不含Tat蛋白。第二代慢病毒转移载体上的5’ LTR是野生型的LTR,含有U3、R和U5元件,依赖Tat蛋白转录HIV RNA基因组,故第二代慢病毒包装系统的包装质粒含有Tat蛋白。
我们的滴度保证仅适用于包装进病毒的区域(从5’ ITR 到3’ ITR)小于腺病毒承载限度(38.7 kb,~野生型HAd5基因组长度36 kb的108%)的载体。超过该范围,超出的那部分序列在包入衣壳时会被剪切掉,导致包装出来的腺病毒颗粒含有不完整的genome。此外,对于如下载体,我们同样不能保证滴度: