腺病毒

腺病毒载体(Adenovirus)能够携带大片段外源DNA、感染分裂细胞和非分裂细胞、诱导体液和细胞免疫应答(这对于疫苗开发是有益的)、表现出高效率的转导和高水平的转基因表达、不整合细胞DNA(在细胞内保持dsDNA游离体)。这些特性使腺病毒作为用于基因治疗的转基因载体、疫苗载体和溶瘤病毒疗法中使用的载体。我们开发出一系列专有技术和试剂,从病毒滴度、纯度、活性以及一致性等方面显著提升了腺病毒包装工艺水平。

目录号 产品信息 规格 滴度 价格(CNY) 生产时间
H106 干扰腺病毒(一个干扰病毒) 1ml 1*1010PFU/ML ¥4800 25个工作日
H107 干扰腺病毒套餐(三个干扰病毒一个阴性对照) 4*1ml 1*1010PFU/ML ¥11000 30个工作日
H108 过表达腺病毒2000bp以下 1ml 1*1010PFU/ML 基因长度*¥1+¥6880 咨询
H109 过表达腺病毒4000bp以下 1ml 1*1010PFU/ML 基因长度*¥1+¥6880 咨询
H110 腺病毒阴性对照 1ml 1*1010PFU/ML ¥1500 10个工作日

我们提供第一代腺病毒(E1/E3-deleted Ad5)和嵌合型腺病毒(Chimeric adenovirus)包装服务。Ad5病毒的感染是通过病毒颗粒表面的纤突(Fiber)与细胞表面受体CAR(Coxsackie virus and adenovirus receptor)特异性结合而介导的。 并不是所有细胞都高表达CAR,Ad5病毒在某些不表达或者低表达CAR的细胞种类上的应用受限。我们开发了嵌合型腺病毒,它的感染是通过嵌合型纤突(Chimeric fiber)与细胞表面分子CD46特异性结合而介导的。

生产规格 非纯化慢病毒制备服务 纯化慢病毒制备服务
交付内容

定制病毒,按照规格交付:

  • ⼩量制备:>1010IFU/ml,10 x 25 ul
  • 中量制备:>1010IFU/ml,10 x 100 ul
  • ⼤量制备:>1011IFU/ml,10 x 100 ul

定制病毒,按照规格交付:

  • ⼤量制备:>1012VP/ml,10 x 100 ul

对照病毒,按照定制病毒的规格对应赠送:

  • ⼩量制备:>1010IFU/ml,100 ul
  • 中量制备:>1010IFU/ml,2 x 100 ul
  • ⼤量制备:>1010IFU/ml,2 x 100 ul

对照病毒,按照定制病毒的规格对应选购:

  • ⼤量制备:>1012VP/ml,10 x 100 ul

聚凝胺(Polybrene,5 mg/ml,200 ul),赠送

聚凝胺(Polybrene,5 mg/ml,200 ul),赠送

辅助病毒,按照定制病毒的规格对应选购:

  • ⼩量制备:>1010IFU/ml,10 x 25 ul
  • 中量制备:>1010IFU/ml,10 x 100 ul
  • ⼤量制备:>1011IFU/ml,10 x 100 ul

辅助病毒,按照定制病毒的规格对应选购:

  • ⼤量制备:>1012VP/ml,10 x 100 ul
病毒重悬液 腺病毒专用储存液 GTS缓冲液
运输/存储 干冰/-80°C,避免反复冻融 干冰/-80°C,避免反复冻融
推荐应用 体外培养细胞转导 动物体内细胞转导

对照病毒

为了更好地开展您的实验,我们按照“对照病毒与定制病毒的生物学应用相匹配”的原则给您赠送或者推荐对照病毒。例如,如果定制病毒表达一个基因,则推荐的对照病毒表达荧光蛋白EGFP。如果定制病毒表达打靶某个基因的shRNA,则对照病毒表达一个Scramble shRNA。推荐的对照病毒信息如下表所示:

对照病毒 对照载体名称 对照载体ID 定制病毒

EGFP对照腺病毒,CMV启动子

pAV[Exp]-CMV>EGFP

VB010000-9299hac

哺乳动物基因表达腺病毒(包含FLEX条件性表达)、哺乳动物腺病毒CRISPR系统、哺乳动物非编码RNA表达腺病毒

EGFP对照腺病毒,EF1A启动子(选购)

pAV[Exp]-EF1A>EGFP

VB900088-2235wrm

mCherry对照腺病毒,CMV启动子(选购)

pAV[Exp]-CMV>mCherry

VB010000-9300kfr

mCherry对照腺病毒,EF1A启动子(选购)

pAV[Exp]-EF1A>mCherry

VB010000-9408agb

Scramble shRNA对照腺病毒,EGFP荧光

pAV[shRNA]-EGFP-U6>Scramble_shRNA

VB010000-9300kfr

哺乳动物shRNA干扰腺病毒

Scramble shRNA对照腺病毒,mCherry荧光

pAV[shRNA]-CMV>mCherry-U6>Scramble_shRNA

VB010000-0021kwc

Scramble miR30-shRNA对照腺病毒,EGFP荧光

pAV[miR30]-CMV>EGFP:Scramble_miR30-shRNA:WPRE

VB010000-9350dnk

哺乳动物miR30-shRNA干扰腺病毒

FLEX-EGFP对照腺病毒(选购)

pAV[FLEX_on]-CMV>rev(EGFP)

VB010000-9327vmy

哺乳动物基因FLEX条件性表达腺病毒

辅助病毒

为了更好地开展您的实验,我们按照“辅助病毒与定制病毒的生物学应用相匹配”的原则给您推荐辅助病毒。例如,如果定制化的病毒是一个gRNA腺病毒(只表达gRNA),则需要一个表达Cas9的辅助病毒,才能进行CRISPR编辑实验。推荐的辅助病毒信息如下表所示:

对照病毒 对照载体名称 对照载体ID 定制病毒

Cas9 腺病毒(选购)

pAV[Exp]-CMV>hCas9

VB180820-1032mbq

哺乳动物gRNA 腺病毒(不含Cas9)

Cre腺病毒(选购)

pAV[Exp]-CMV>Cre

VB180308-1398jmt

哺乳动物基因FLEX条件性表达腺病毒

我们的非纯化腺病毒存储于腺病毒专用储存液,纯化腺病毒存储于GTS缓冲液中,并采用干冰运输。收到腺病毒后,立即放置于-80°C,可保存约一年。若放置于-20°C,则可保存2-3周。融解后的腺病毒可在4°C保存1-2周。虽然腺病毒比其他多数病毒稳定(如慢病毒),但是也请避免反复冻融,因为这会导致腺病毒滴度显著下降。

步骤 描述 时间

Plasmid linearization and Transfection
我们常规使用的第一代腺病毒包装系统包括1个含有缺失了E1/E3基因的腺病毒基因组序列的转移质粒(Transfer plasmid)和1个表达E1基因的包装细胞(adenoviral E1-expressing cell line),其包装流程是通过内切酶PacI将携带目的基因(Gene of Interest,简称GOI)的转移质粒线性化。线性化的质粒DNA随后转染到包装细胞中,E1基因的表达产物激活转移质粒上的腺病毒基因的表达(E3基因的缺失不影响腺病毒的包装),产生重组腺病毒颗粒。此时生产出来的为粗制的腺病毒。 第1-6天

Virus amplification
粗制的腺病毒再次转导到在包装细胞中进行扩增。 第7天

Concentration and purification
对于非纯化的腺病毒,腺病毒可以被细胞直接分泌到培养基中,然后进行收集。对于超纯化腺病毒,则还需要进一步的氯化铯(CsCl)密度梯度离心进一步纯化和浓缩。 第24天

Quality Control
对于每一个我们生产的腺病毒,质量控制均包括基于免疫组化(IHC)的滴度测定(Titer determination)、微生物(细菌和真菌)检测(Bioburden test)和支原体检测(Mycoplasma test)。 若转移载体同时编码一个荧光蛋白,我们还会将病毒进行细胞转导以测定相应的荧光表达情况(Transduction test)。此外,对于超纯化腺病毒,我们还可以检测内毒素水平(Endotoxin test)。 第28天及以后

注意: 第三代慢病毒包装系统只能包装第三代的慢病毒转移载体。但是第二代慢病毒包装系统既能包装第二代,也能包装第三代的慢病毒转移载体。第三代慢病毒转移载体上的5’ LTR中的U3元件是被一个外源启动子替代(如CMV启动子或者RSV启动子),使其不依赖Tat蛋白进行HIV RNA基因组的转录,故第三代慢病毒包装系统的包装质粒不含Tat蛋白。第二代慢病毒转移载体上的5’ LTR是野生型的LTR,含有U3、R和U5元件,依赖Tat蛋白转录HIV RNA基因组,故第二代慢病毒包装系统的包装质粒含有Tat蛋白。

我们的滴度保证仅适用于包装进病毒的区域(从5’ ITR 到3’ ITR)小于腺病毒承载限度(38.7 kb,~野生型HAd5基因组长度36 kb的108%)的载体。超过该范围,超出的那部分序列在包入衣壳时会被剪切掉,导致包装出来的腺病毒颗粒含有不完整的genome。此外,对于如下载体,我们同样不能保证滴度:

  • 包含对包装过程有不利影响的序列,例如毒性基因(如促凋亡基因);破坏包装细胞或病毒的完整性(如导致细胞聚集的膜蛋白)的基因 ;易于重排或者产生二级结构的序列(如重复序列或者高GC含量序列)。
  • ⽤户提供的载体,因为我们无法控制载体质量。

周期是指订单接受到发货之间的时间。不包括需要客户提供任何物料(如病毒载体)的等待时间。

如需客户提供慢病毒载体,则请按照外来物品接收指南将载体寄送给我们。请严格按照我们的指南来进行装运以免造成物品的任何延误和损坏。客户提供的所有材料均需经过QC检测,每一份材料附加检测费用。请注意,客户提供物品接收并通过QC之后生产才正式开始。
地址:苏州市吴江区长安路650号
电话:0512-63061203
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