0512-63061203
腺相关病毒（Adeno-associated virus，简称AAV）是一种对人类没有致病性的细小病毒（Parvovirus）。虽然AAV感染在人类中很常见，但与任何已知疾病无关，加上其转导分裂细胞和静止细胞的能力、非常低的免疫原性以及转基因长期表达（与野生型AAV病毒感染后整合到宿主细胞DNA不同，重组AAV载体主要作为染色体外游离体长期存在）。这些特性使AAV成为炙手可热的用于基因治疗的病毒载体。我们开发出一系列专有技术和试剂，从病毒滴度、纯度、活性以及一致性等方面显著提升了腺相关病毒包装工艺水平。
| 目录号 | 产品信息 | 规格 | 滴度 | 价格（CNY） | 生产时间 |
|---|---|---|---|---|---|
| H111 | 干扰腺相关病毒（一个干扰病毒） | 1ml | 1*1012VG/ML | ￥6880 | 15个工作日 |
| H112 | 干扰腺相关病毒套餐（三个干扰病毒一个阴性对照） | 4*1ml | 1*1012VG/ML | ￥16800 | 20个工作日 |
| H113 | 过表达腺相关病毒2000bp以下 | 1ml | 1*1012VG/ML | 基因长度*￥1+￥6880 | 咨询 |
| H114 | 过表达腺相关病毒2000bp以下 | 1ml | 1*1012VG/ML | 基因长度*￥1.2+￥7880 | 咨询 |
| H115 | 腺相关病毒阴性对照 | 1ml | 1*1012VG/ML | ￥1500 | 10个工作日 |
我们提供的AAV的包装服务涵盖以下血清型：
| 血清型 | 组织嗜性 |
|---|---|
| AAV1 | 平滑肌, 中枢神经系统, 肺, 视网膜, 内耳组织, 胰腺, 心脏, 肝 |
| AAV2 | 平滑肌, 中枢神经系统, 肝, 肾, 视网膜, 内耳组织 |
| AAV3 | 平滑肌, 肝, 肺 |
| AAV4 | 中枢神经系统, 视网膜, 肺, 肾 |
| AAV5 | 平滑肌, 中枢神经系统, 肺, 视网膜 |
| AAV6 | 平滑肌, 心脏, 肺, 脂肪组织, 肝 |
| AAV6.2 | 肺, 肝, 内耳组织 |
| AAV7 | 平滑肌, 视网膜, 中枢神经系统, 肝 |
| AAV8 | 平滑肌, 中枢神经系统, 视网膜, 内耳组织, 肝, 胰腺, 心脏, 肾, 脂肪组织 |
| AAV9 | 平滑肌, 肺, 肝, 心脏, 胰腺, 中枢神经系统, 视网膜, 内耳组织, 睾丸, 肾 |
| AAVrh10 | 平滑肌, 肺, 肝, 心脏, 胰腺, 中枢神经系统, 视网膜, 肾 |
| AAV-DJ | 肝, 心脏, 肾, 脾 |
| AAV-DJ/8 | 肝, 脑, 脾 |
| AAV-PHP.eB | 中枢神经系统 |
| AAV-PHP.S | 外周神经系统 |
| AAV2-retro | 脊神经 |
| AAV2-QuadYF | 内皮细胞 |
| AAV2.7m8 | 视网膜, 内耳组织 |
注意：携带目的基因的转移质粒上的ITR序列来自于AAV2。一般来说，包装不同血清型的AAV，指的是使用不同血清型的衣壳蛋白表达质粒，与携带AAV2 ITR的转移质粒进行包装。
| 生产规格 | 非纯化ssAAV制备服务 | 纯化ssAAV制备服务 |
|---|---|---|
| 交付内容 |
定制病毒，按照规格交付：
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定制病毒，按照规格交付：
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对照病毒，按照定制病毒的规格对应赠送：
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对照病毒，按照定制病毒的规格对应选购：
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| 病毒重悬液 | 50 mM Tris缓冲液（添加150 mM NaCl和5 mM MgCl2） | pH7.4 PBS缓冲液（添加200 mM NaCl和0.001% pluronic F-68） |
| 运输/存储 | 干冰/-80°C，避免反复冻融 | 干冰/-80°C，避免反复冻融 |
| 推荐应用 | 体外培养细胞转导 | 体外培养细胞转导、动物体内细胞转导 |
为了更好地开展您的实验，我们按照“对照病毒与定制病毒的生物学应用相匹配”的原则给您赠送或者推荐对照病毒。例如，如果定制病毒表达一个基因，则推荐的对照病毒表达荧光蛋白EGFP。如果定制病毒表达打靶某个基因的shRNA，则对照病毒表达一个Scramble shRNA。推荐的对照病毒信息如下表所示：
| 对照病毒 | 对照载体名称 | 对照载体ID | 定制病毒 | |
|---|---|---|---|---|
EGFP对照AAV病毒 |
pAAV[Exp]-CMV>EGFP:WPRE |
VB010000-9394npt | 哺乳动物基因表达AAV病毒（包含Tet-On诱导表达和FLEX条件性表达）、哺乳动物AAV CRISPR系统、哺乳动物非编码RNA表达AAV病毒 |
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mCherry对照AAV病毒 |
pAAV[Exp]-CMV>mCherry |
VB151126-10021 | ||
Scramble shRNA对照AAV病毒，EGFP荧光 |
pAAV[shRNA]-EGFP-U6>Scramble_shRNA |
VB010000-0023jze | 哺乳动物shRNA干扰AAV病毒 |
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Scramble shRNA对照AAV病毒，mCherry荧光 |
pAAV[shRNA]-CMV>mCherry-U6>Scramble_shRNA |
VB010000-0024wah | ||
Scramble miR30-shRNA对照AAV病毒，EGFP荧光 |
pAAV[miR30]-CMV>EGFP:Scramble_miR30-shRNA:WPRE |
VB010000-9397wgw | 哺乳动物miR30-shRNA干扰AAV病毒 |
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Tet-On EGFP 对照AAV病毒（选购） |
pAAV[Tet_on]-TRE>EGFP-CBh>tTS:T2A:rtTA |
VB010000-0053bw | 哺乳动物基因Tet-On诱导表达AAV病毒 |
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FLEX-EGFP对照AAV病毒（选购） |
pAAV[FLEX_on]-CMV>rev(EGFP) |
VB180820-1044gcq | 哺乳动物基因FLEX条件性表达AAV病毒 |
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为了更好地开展您的实验，我们按照“辅助病毒与定制病毒的生物学应用相匹配”的原则给您推荐辅助病毒。例如，如果定制病毒是一个只含TRE启动子的TetOn慢病毒，则需要一个表达rtTA的辅助病毒，才能进行诱导表达实验。推荐的辅助病毒信息如下表所示：
| 对照病毒 | 对照载体名称 | 对照载体ID | 定制病毒 |
|---|---|---|---|
SaCas9 AAV病毒（选购） |
pAAV[Exp]-CMV>saCas9 |
VB180125-1089ffa | 哺乳动物gRNA AAV病毒（不含Cas9） |
Cre AAV病毒（选购） |
pAAV[Exp]-CMV>Cre |
VB171024-1202yau | 哺乳动物基因FLEX条件性表达AAV病毒 |
| 步骤 | 描述 | 时间 |
|---|---|---|
 Triple-transfection |
我们常规使用的helper-free腺相关病毒包装系统包括1个转移质粒（Transfer plasmid）、1个Rep和Cap表达质粒（Rep-Cap plasmid）和1个辅助质粒（Helper plasmid），其包装过程是将携带目的基因（Gene of Interest， 简称GOI）和ITR序列的转移质粒、表达特定血清型衣壳蛋白的Rep-Cap质粒和编码介导腺相关病毒复制的腺病毒基因（E2、E2A和VA）的辅助质粒共转染HEK293T包装细胞，这个转染过程称为三质粒转染（Triple-transfection）。 | 第1天 |
 Supernatant collection |
在细胞里，转导质粒表达包含目的基因（Gene of Interest, GOI）的AAV基因组，Rep-Cap质粒表达特定血清型的AAV衣壳蛋白，辅助质粒表达辅助AAV基因组表达翻译的组分。三者共同作用从而在细胞中生成完整的AAV病毒颗粒。细胞短暂孵育后，根据血清型的不同，收集上清或者细胞裂解液获取病毒颗粒。 | 第3天 |
 Concentration and purification |
PEG浓缩病毒颗粒。对于超纯化腺相关病毒（体内应用级别），再通过氯化铯（CsCl）密度梯度离心对病毒颗粒进一步纯化和浓缩。 | 第5天 |
 Quality Control |
对病毒采用ITR qPCR方法进行滴度测定（Titer determination）、并且还进行微生物检测（Bioburden test，针对细菌、真菌）、支原体检测（Mycoplasma test）等。 若转移载体同时编码一个荧光蛋白，我们还会将病毒进行细胞转导以测定相应的荧光表达情况（Transduction test）。此外，对于超纯化AAV病毒，我们还可以检测内毒素水平（Endotoxin test）和使用SDS-PAGE方法检测病毒纯度（Virus purity test）。。 | 第7天及以后 |
我们的滴度保证仅适用于包装进病毒的区域（从5’ ITR到3’ ITR）小于腺相关病毒承载限度（4.7 kb，～野生型AAV2基因组长度）的载体。超过该范围，超出4.7 kb的那部分序列在包入衣壳时会被剪切掉，导致包装出来的AAV病毒颗粒含有不完整的genome，不仅影响ITR qPCR滴度检测，而且影响转基因表达。此外，对于如下情况，我们同样不能保证滴度：
